2.×μm UHPLC色譜柱
要完全實現(xiàn)UHPLC色譜柱的更高柱效，就必須讓液相系統(tǒng)的擴散效應對色譜柱的影響盡可能小。小顆粒色譜柱，會讓色譜峰更窄更尖銳，提高分離度；但是，更窄的色譜峰，對柱外擴散體積更為敏感。因此，根據(jù)系統(tǒng)的擴散體積，匹配合適的色譜柱規(guī)格，對于實現(xiàn)分離性能至關重要。
如何選擇合適的亞三微米色譜柱？
根據(jù)如下四步驟加以考慮：
色譜填料/鍵合相的選擇性與耐受性：滿足目標應用的需要；
色譜柱長與粒徑的比值L/dp：色譜柱的柱效水平是否滿足目標應用的分離度需求；
柱長L與粒徑dp對柱壓的影響：考慮色譜柱運行柱壓，是否能兼容您的液相系統(tǒng)；
色譜柱內(nèi)徑：對于擴散體積較大的系統(tǒng)，選擇4.6 mm內(nèi)徑，可以減少系統(tǒng)對柱效的影響程度。
色譜柱規(guī)格選擇指導
系統(tǒng) | HPLC | UHPLC | UPLC |
擴散體積測量值 | >40μL | 22-29μL | <20μL |
常規(guī)操作壓力 | <4000 psi | <10,000 psi | <18,000 psi |
色譜柱粒徑 | 3-5μm | 2-3μm | <2μm |
色譜柱內(nèi)徑 | 4.6 mm (3.0 mm) | 3.0mm (2.1mm) | 2.1mm (1.0 mm) |
色譜柱長度 | 75-250mm | 50-100mm | ≤150mm |
以上根據(jù)Waters LC系統(tǒng)來推薦色譜柱規(guī)格。
對任何LC系統(tǒng)都適用的柱規(guī)格
在轉移LC方法時，儀器譜帶展寬是需要確定的十分關鍵的LC儀器參數(shù)之一。了解譜帶展寬，能幫助色譜分離化學家所開發(fā)的方法，兼容任何一臺LC系統(tǒng)。如下色譜柱規(guī)格表，基于儀器譜帶展寬名義測量值。
系統(tǒng) | LC技術 | 譜帶展寬* | 推薦色譜柱的粒徑與內(nèi)徑 |
Shimadzu Prominence UFLC | HPLC | 41μL | XBridge 3.5, 5μm; XSelect 3.5, 5 μm; CORTECS 2.7 μm 3.0–4.6 mm I.D. |
Alliance 2695 HPLC | HPLC | 29 μL | |
Agilent 1260 UHPLC (600 bar) | HPLC | 28 pL | |
Thermo Accela UHPLC | HPLC | 21μL | XBridge 2.5, 3.5, 5 μm; XSelect 2.5, 3.5, 5 μm; CORTECS 2.7 μm 3.0 mm I.D. |
Agilent 1290 UHPLC (1200 bar) | UHPLC | 17 μL | |
ACQUITY Arc | UHPLC | 23 μL | XBridge 2.5, 3.5, 5 μm; XSelect 2.5, 3.5, 5 μm; ACQUITY UPLC HSS 1.8 μm, CORTECS 2.7 μm 3.0 mm I.D. |
ACQUITYUPLC | UHPLC | 12 μL | ACQUITY UPLC BEH 1.7 μm; ACQUITY UPLC CSH 1.7 μm; ACQUITY UPLC HSS 1.8 μm, CORTECS 1.6 μm 2.1 mm I.D. |
ACQUITY UPLC H-Class W/Column Manager | UPLC | 12 μL | |
ACQUITY UPLC H-Class | UPLC | 9μL |
*這些測量數(shù)值基于未經(jīng)調(diào)整的儀器，僅作為參考。對于系統(tǒng)的泵、管路連接、以及儀器參數(shù)的任何調(diào)整，都會改變該儀器的譜帶展寬。
